DEC1基因真核表达质粒的构建及对乳腺癌细胞增殖的影响

目的:构建DEC1真核表达载体pEGFP-Nl-DEC1,探讨DEC1基因对乳腺癌细胞增殖的影响及可能机制。方法:提取人乳腺癌癌细胞MCF-7总RNA,扩增获得DEC1基因,将DEC1基因插入真核表达质粒pEGFP-Nl,将成功构建的pEGFPNl-DEC1及pEGFP-Nl质粒利用PEI转染MCF-7细胞,并通过G418筛选得到稳定转染细胞系。通过Western blot检测转染前后细胞DEC1、CyclinD1蛋白表达水平;MTT法检测转染前后MCF-7细胞增殖的变化。结果:成功构建DEC1真核表达载体pEGFP-Nl-DEC1;与pEGFP-Nl组和空白对照组相比,pEGFP-Nl-DEC1组DEC1表达明显增高(P<0.05);cyclin D1的表达明显降低(P<0.05);pEGFP-Nl-DEC1组细胞增殖能力明显受到抑制。结论:过表达DEC1可抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖,DEC1可能通过下调cyclin D1基因的表达从而阻止细胞周期及TGF-β信号通路而发挥作用。