重叠延伸PCR法构建华支睾吸虫磷酸甘油酸变位酶突变体CsPGM-H190Q

为了研究华支睾吸虫磷酸甘油酸变位酶的活性位点,试验通过生物信息学分析和重叠延伸PCR的方法,对该酶的底物结合位点进行突变,得到突变体基因CsP GM-H190Q,将其克隆至表达载体pET-24b(+)上,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,利用IPTG进行诱导表达。结果表明:华支睾吸虫磷酸甘油酸变位酶突变体蛋白(CsP GM-H190Q)的分子质量为29.0 ku,Ni-NTA HisTrap柱纯化后得到纯度较高的蛋白。