凋亡在原发性肺损伤中的变化

目的 气管滴注法构建脂多糖（LPS）引起的大鼠原发性急性肺损伤（acute lung injury,ALI）模型,研究肺组织细胞凋亡的时间变化。方法 30只雄性SD大鼠随机均分为5组：对照组,LPS（1、6、12和24 h）组。LPS组气管内滴注LPS,5 mg/kg,正常对照组气管内注入等量生理盐水。于1 h、6 h、12 h和24 h后处死,取肺组织,行苏木精-伊红（HE）染色,观察病理变化;测定肺湿重/干重（W/D）比值;TUNEL（terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick end labeling）法,检测细胞凋亡;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测凋亡蛋白cleaved-capase3的表达水平。结果 HE染色可见,LPS滴注后肺泡间隔增宽、间质充血水肿、肺泡腔变窄、炎性细胞渗出及小气道损伤随着时间增加呈现趋势性变化。LPS组肺W/D比对照组明显增加。TUNEL法检测发现,1 h、6 h、12 h和24 h实验组肺组织细胞凋亡指数（apoptosis index,AI）较对照组明显升高,且1~12 h内AI值随时间增加而增加,其中12 h AI值最高,24 h时间点AI有所下降。对照组AI低于实验组（P〈0.01）。Western blot发现,在1 h、6 h、12 h和24 h实验组cleaved-caspase-3含量较对照组明显升高,且1~12 h内随时间增加而增加,其中12 h最高,24 h有所下降。对照组cleaved-caspase-3含量低于实验组（P〈0.01）。结论 LPS导致大鼠原发性肺损伤随着时间的推移而逐渐加重,大鼠肺组织细胞大量凋亡,其凋亡程度对时间的延长呈现一先升后降的过程。