实时荧光环介导恒温扩增技术检测嗜麦芽窄食单胞菌方法的建立

目的建立嗜麦芽窄食单胞菌16S ribosomal RNA基因的实时荧光环介导恒温扩增(Real Amp)快速检测方法,为嗜麦芽窄食单胞菌的快速检测提供一种新的方法。方法针对嗜麦芽窄食单胞菌16S ribosomal RNA基因设计的特异性引物,利用链置换DNA聚合酶(Bst DNA polymerase)恒温反应60 min,通过实时检测荧光信号来检测嗜麦芽窄食单胞菌16S ribosomal RNA基因的扩增。结果筛选实验发现:在使用引物4时,出峰时间最短,故选择引物4进行后续实验操作。在11株相关菌株的检测中,除嗜麦芽窄食单胞菌出现很好的阳性外,其余菌株均为阴性。本研究检测嗜麦芽窄食单胞菌DNA的灵敏度可达到4.07×10-5ng/μL。重复性分析表明:同一样品重复检测3次,几乎同时出峰,扩增曲线几乎重叠,说明Real Amp的重复性良好。结论嗜麦芽窄食单胞菌的Real Amp检测方法稳定性高,反应快速,特异性强,具有较大的推广及应用前景,可用于嗜麦芽窄食单胞菌的快速检测。