胶体金免疫层析法快速检测李痘病毒的研究

用RT-PCR的方法克隆李痘病毒的外壳蛋白(CP)基因,然后将其连接到原核表达载体p ET29(a)上,得到p ET29a-PPV重组载体,然后将该载体转化大肠杆菌BL21(DE3),经过IPTG诱导PPV CP基因在大肠杆菌中得到了高效表达。回收表达蛋白后免疫家兔,获得PPV特异性抗血清,经过酶联免疫吸附法测定其效价达到3.2×104,然后采用该抗血清制备出专门检测李痘病毒的胶体金免疫试纸条,测试结果表明,该试纸条不仅特异性强、稳定性好,灵敏度也高,可以检测到1μg/m L粗提病毒和稀释100倍的病汁液,操作简便,10分钟之内即可出检测结果,特别适宜口岸检疫和田间快速诊断。