miR-363、Eomes在人脐带间充质干细胞诱导神经样细胞中的表达及意义

目的观察miR-363、脱中胚蛋白(Eomes)在人脐带间充质干细胞(HUMSCs)诱导的神经样细胞中的表达变化,并探讨其意义。方法培养HUMSCs并应用3-异丁基-1-甲基黄嘌呤、视黄酸、丁基羟基茴香醚联合诱导分化为神经样细胞,采用免疫荧光化学法检测诱导前后细胞β-Ⅲ-tubulin和NSE的表达;real-time PCR检测诱导前后细胞中miR-363和Eomes mRNA的表达,Western blot检测诱导前后细胞中Eomes蛋白的表达;运用生物信息学方法(Target Scan和miRanda)对miR-363和Eomes基因的靶向配对关系进行预测,采用荧光素酶报告系统进行鉴定。结果光镜下可见HUMSCs呈梭形均匀分布,诱导分化后细胞呈圆形、有长的突起;免疫荧光检测发现诱导14 d的细胞β-Ⅲ-tubulin和NSE表达呈阳性,神经样细胞诱导成功。HUMSCs诱导分化前后miR-363相对表达量分别为1.00±0.31、0.32±0.02,Eomes mRNA相对表达量分别为1.00±0.22、15.73±0.85,Eomes蛋白相对表达量分别为0.21±0.02、0.78±0.06,两者比较,P均<0.05。生物信息学软件结果显示miR-363和Eomes基因靶向配对良好,荧光素酶报告系统鉴定发现miR-363能够抑制Eomes mRNA表达。结论 miR-363能够靶向作用Eomes 3'UTR负性调控HUMSCs神经样细胞分化后Eomes的表达。