药用甘草SSR-PCR反应体系的优化与引物筛选

目的为了有效地确定甘草SSR-PCR反应体系,进一步筛选具有多态性的甘草SSR引物。方法采用正交设计试验L16(45)结果建立了适合甘草SSR-PCR反应的最佳体系,20μl体系中各组分的浓度分别为:2.0μl 10×Buffer,Mg2+浓度为1.0 mmol/L,模板DNA浓度30 ng/20μl,d NTPs浓度为0.15 mmol/L,引物浓为0.3μmol/L,Taq DNA聚合酶用量为1.0 U/20μl。利用优化体系对69对SSR引物进行了筛选,共筛选出33对在4种药用甘草中均能有效扩增且多态性较好的SSR引物。结论该研究为利用SSR标记对甘草属植物的遗传多样性分析、分子辅助育种、指纹图谱构建和物种鉴定及野生资源保护等工作提供技术支撑。