人黑素细胞胞吐黑素体直观证据的观察研究

目的探究皮肤黑素体的分泌和传递机制，为人黑素细胞胞吐黑素体寻找直观形态学证据。方法取健康青少年包皮环切术后废弃包皮，分离并培养黑素细胞（MC）及KC，倒置显微镜下观察细胞形态，免疫组织化学染色法对MC进行鉴定，免疫荧光染色法对KC进行鉴定。将MC按随机数字表法分为空白对照组、α促黑素细胞激素（α-MSH）刺激组、前列腺素E2（PGE2）刺激组及KC共培养组，每组4皿。空白对照组细胞用8mLMCDB153培养液培养；α—MSH刺激组细胞用8mL含有100nmol／Lα-MSH的MCDB153培养液培养；PGE，刺激组细胞用8mL含有200nmol／LPGE，的MCDB153培养液培养；KC共培养组细胞加入2×10^5个／mLKC，用8mLMCDB153培养液培养。培养第3天，原子力显微镜（AFM）下观察空白对照组以及KC共培养组MC表面形态；环境扫描电镜（ESEM）下观察4组MC表面形态，并计数细胞表面坑状结构及球形颗粒。对数据行单因素方差分析、LSD检验。结果（1）MC形态单一，呈长梭形，有2个或3个树突，胞体呈强反光性；KC彤态均一，呈多边形、铺路石状，胞核居中，胞质内可见黑色或褐色点状物质。MC呈铁锈色，染色均一，未见其他细胞混染；KC胞质呈鲜红色荧光，胞核未染色。综上，分离培养的细胞为MC和KC。（2）AFM下可见空白对照组MC树突及胞体表面较光滑，坑状结构较少。KC共培养组MC树突表面粗糙，坑状结构较空白对照组MC树突表面明显增多；KC共培养组MC树突尾端表面坑状结构较胞体表面明显增多，坑状结构为鳞状层叠结构。（3）ESEM下可见空白对照组MC树突主干表面光滑，偶见小球状结构，随着树突向外延伸，树突尾部呈伞状展开，伞状表面分布大小较均匀的坑状凹陷。α—MSH刺激组、PGE，刺激组、KC共培养组MC表面坑状结构数分别为（90±38）、（63±15）、（62±29）个，较空白对照组的（33±11）个明显增多（P值均小于0．05）；α—MSH刺激组MC表面坑状结构数较PGE，刺激组、KC共培养组明显增多（P值均小于0．05）。α-MSH刺激组MC表面球形颗粒数为（80±30）个，较空白对照组的（29±8）个、PGE，刺激组的（47±22）个、KC共培养组的（42±16）个明显增多（P值均小于0．05）。结论人MC表面的坑状结构与黑素体胞吐分泌作用密切相关，为证明黑素体通过胞吐作用进行分泌和传递提供了直观形态学证据。