摘要
本文拟对结核分枝杆菌ATP硫酸化酶基因进行原核表达,并鉴定其抗原性。根据结核分枝杆菌H37Rv ATP硫酸化酶(cys D)基因设计引物,扩增出大小约为999bp的目的基因片段。将PCR纯化产物克隆至PMD18-T中,构建重组质粒载体PMD18-T-cys D。以SacⅠ和HindⅢ双酶切重组载体PMD18-T-cys D和表达载体p ET-32a(+),并将纯化的cys D基因亚克隆至p ET-32a(+)中,构建出原核重组表达质粒p ET-32a-cys D。将p ET-32a-cys D重组质粒转化至感受态细胞E.coli BL21(DE3)中,经IPTG诱导和SDS-PAGE分析,可见约55KD目的蛋白带。用Western blot分析方法鉴定该蛋白。结果显示纯化后所获得的融合蛋白与抗结核分支杆菌阳性血清发生特异性反应。表明研究成功构建了p ET-32a-cys原核表达载体,纯化的融合蛋白具有良好的免疫原性。
