红毛丹ISSR-PCR反应体系优化及引物筛选

采用单因素和正交试验对红毛丹ISSR-PCR反应体系中的各组分(DNA、引物、Mg^(2+)、dNTPs和Taq DNA聚合酶)进行了优化比较,确定了最佳的20μL反应体系包括DNA模板30ng、dNTPs 0.1mmol/L、引物0.2μmol/L、Taq DNA聚合酶1.0U、Mg^(2+)2.0mmol/L;进一步利用该体系从20条ISSR引物中筛选出扩增条带清晰、多态性好的引物9条,从3个红毛丹品系中共扩增出多态性条带204条,多态条带比例达76%。