红花黄色素对TGF-β1诱导的人肺泡上皮A549细胞转分化的抑制作用及其信号转导机制研究

目的:通过体外培养人肺泡上皮细胞A549,用TGF-β1刺激其发生上皮-间质转化,运用现代分子生物学和超微病理学实验技术,探讨红花黄色素在防治肺间质纤维化上皮间质转化中的干预作用及机制。方法:将正常培养的人肺泡上皮细胞A549分6组:正常对照组、TGF-β1诱导组(TGF-β1终浓度为5ng/ml,诱导24h)、地塞米松组(地塞米松2μg/mL)、红花黄色素低、中、高3个剂量干预组(红花黄色素25μg/mL+TGF-β1 5ng/mL、红花黄色素中剂量组红花黄色素50μg/mL+TGF-β15ng/mL、红花黄色素高剂量组红花黄色素75μg/mL+TGF-β1 5ng/mL)。TGF-β1 5ng/L干预A549细胞生长24h,采用四甲基偶氮唑盐法(MTT法)检测不同剂量红花黄色素作用于TGF-β1刺激A549细胞后其发生上皮-间质转化后各组的吸光值(OD值),计算其增殖活性,绘制细胞增殖曲线。采用倒置显微镜观察各组细胞的生长状态与形态变化。结果:(1)MTT检测结果显示:与正常对照组相比较,TGF-β1诱导组细胞活力略高,差异具有统计学意义(P<0.05);红花黄色素中药干预组细胞的增殖活力下降,与正常对照组和TGF-β1诱导组相比较,差异有统计学意义(P<0.05)。(2)倒置显微镜观察显示:经过TGF-β1刺激后,A549细胞由正常的铺路石样贴壁生长呈现出间质细胞的特征,呈明显的拉长状态,由鹅卵石状转变为纺锤型或梭型,出现伪足样改变,藤索样生长,类似于成纤维细胞,且细胞之间间隙增大。结论:通过观察红花黄色素各剂量组发现,细胞的形态逐渐接近正常的A549细胞,视野内细胞的数目按一定的剂量效应关系减少。