曲霉菌半乳甘露聚糖抗原提取工艺优化

近年来,随着科技的发展,广谱抗生素及免疫抑制剂在临床被广泛使用,免疫缺陷患者、癌症患者、器官移植患者及血液病患者等感染侵袭性真菌病概率急剧升高。真菌病感染如果不能早期治疗,死亡率极高。其中,曲霉特别是烟曲霉(Aspergillus fumigatus)已经逐渐成为临床上一种重要的致病真菌。目前传统的侵袭性曲霉菌感染检测的金标准是无菌体液培养和组织活检。但传统的分离培养的方法阳性率低、周期长,极大的贻误病情,因此,检测烟曲霉抗原是目前临床公认的快速早期诊断烟曲霉菌感染的有效方法。烟曲霉菌的主要抗原成分是半乳甘露聚糖(Galactomannan,GM),所以血清中GM抗原检测是一种快速、高效、特异性的早期诊断曲霉菌感染的方式。目前国内对曲霉菌半乳甘露聚糖提取纯化的研究不多,本次研究以烟曲霉的菌体为原料,研究了GM抗原的提取工艺及后期纯化的方式。通过液氮研磨、超声等方式对曲霉菌半乳甘露聚糖进行提取,获得粗提物后用无水乙醇以及水肼和亚硝酸处理。并将上述处理得到的溶液用Mono Q层析柱及超滤技术进行抗原纯化,最终获得了GM抗原纯品。通过紫外分光光度及液相色谱等技术对提取的抗原进行验证,发现通过优化曲霉菌半乳甘露聚糖提取工艺制备得到的半乳甘露聚糖抗体的得率较高且纯度较好。