RP-HPLC测定熟地黄中4种核苷类含量

目的:采用反相高效液相色谱法(RP-HPLC)测定熟地黄中尿苷、次黄嘌呤、腺苷、腺嘌呤4种核苷类含量。方法:制备尿苷、次黄嘌呤、腺苷、腺嘌呤对照品储备液和供试品溶液,XTerra C18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相为乙腈-0.04mol·L磷酸二氢钾溶液,梯度洗脱,流速1.0mL·min-1,柱温30℃,检测波长为254nm,进样量为20μL。考察线性关系、精密度试验、重复性试验、稳定性试验、加样回收率试验。结果:尿苷、次黄嘌呤、腺苷、腺嘌呤分离度良好,保留时间分别为18.2、13.0、61.7、22.9min。尿苷、次黄嘌呤、腺苷、腺嘌呤的回归方程分别为:Y=41770X+3984、Y=72980X+1382、Y=70880X+2873、Y=93720X-4092,相关系数r分别为:0.9991、0.9999、0.9993、0.9997。精密度试验RSD值分别为1.18%、0.83%、0.25%、1.35%。重复性试验RSD值分别为0.86%、1.22%、2.61%、1.73%。稳定性试验RSD值分别为0.45%、1.09%、2.04%、1.52%。平均回收率分别为99.9%、100.3%、97.8%,98.4%、100.5%、101.2%,99.3%、100.7%、97.5%,98.3%、100.8%、96.7%,RSD分别为1.92%、0.73%、0.89%,1.42%、1.05%、0.72%,1.33%、0.82%、1.25%,2.13%、0.81%、1.74%。结论:RP-HPLC可用于熟地黄中尿苷、次黄嘌呤、腺苷、腺嘌呤4种核苷类含量测定。