鲍曼不动杆菌外膜囊泡的提取、纯化及活性检测

目的提取并纯化鲍曼不动杆菌(AB)标准株ATCC17978的外膜囊泡(omv),观察其形态、结构并检测其活性。方法常规培养鲍曼标准株,Optiprep密度梯度超速离心提取并纯化其omv,经负染电镜检测omv形态;BCA法检测omv总蛋白浓度,SDS-PAGE分析蛋白相对分子质量大小;用纯化的omv和蛋白酶K处理后的omv分别刺激人肺癌上皮细胞A549,同时用设不加omv的A549细胞做对照,酶链免疫吸附(ELISA)法检测炎性因子白细胞介素(IL)-8表达水平。结果鲍曼不动杆菌分泌的omv为10~200nm的球状囊泡结构;其含有的总蛋白浓度为43.2mg/mL;ELISA结果提示,鲍曼不动杆菌分泌的omv可刺激A549细胞产生炎性因子IL-8,且产生水平与omv剂量呈正比。结论纯化的鲍曼不动杆菌的omv为10~200nm的双层囊泡结构,内含多种毒力蛋白,能刺激人肺癌上皮细胞A549产生IL-8。