人卵巢癌紫杉醇耐药细胞株SKOV-3/Taxol的建立及其耐药机制研究

目的:建立紫杉醇耐药细胞株SKOV-3/Taxol,探讨卵巢癌紫杉醇获得性耐药潜在的分子机制。方法:以人卵巢癌细胞株SKOV-3为亲本细胞,采用紫杉醇(Taxol)浓度梯度递增法诱导建立卵巢癌紫杉醇耐药细胞株SKOV-3/Taxol。光学显微镜及电子显微镜观察细胞形态,MTT法检测细胞药物敏感性,流式细胞术检测细胞周期分布及细胞凋亡水平,实时荧光定量PCR和Western Blot方法分别检测多药耐药基因以及凋亡和细胞周期调控相关基因的转录和翻译水平。结果:建立的紫杉醇耐药细胞株SKOV-3/Taxol对紫杉醇具有显著耐药性,对阿霉素及5-氟脲嘧啶(5-FU)也产生强烈的交叉耐药,细胞形态也发生明显的变化。与亲本细胞相比,SKOV-3/Taxol细胞G2/M阻滞明显低于SKOV-3,其凋亡率也显著低于SKOV-3,差异均有统计学意义(P<0.05),耐药细胞株中MRP1、MAP-Tau和CDK1基因表达水平显著提高。结论:成功建立人卵巢癌紫杉醇耐药细胞株SKOV-3/Taxol的基础上,多药耐药相关蛋白MRP1、微管相关蛋白MAP-Tau以及细胞周期蛋白依赖性激酶1(CDK1)基因过表达与卵巢癌细胞对紫杉醇耐药有关。