猪A群轮状病毒一步法RT-PCR检测方法的建立与初步应用

为建立一种快速检测猪A群轮状病毒的检测方法,基于猪A群轮状病毒NSP4基因序列利用Premier 5.0软件设计并合成了一对特异性引物,建立了猪A群轮状病毒一步法RT-PCR检测方法,通过反复试验确定了引物的最佳退火温度为56℃,通过灵敏性试验确定了最低的检测浓度为13.17 pg/μL,通过特异性与稳定性试验表明该方法具有良好的特异性与稳定性,同时应用该方法对临床病料进行了检测,并选取扩增阳性样品进行了序列测定与分析,样品阳性率为90%(27/30),与Gen Bank中其他猪A群轮状病毒NSP4基因序列同源性均在98%以上。结果表明:该方法具有良好的灵敏性、特异性与稳定性,可以为猪A群轮状病毒病的快速检测和流行病学调查提供有效的技术手段。