桑根酮C通过激活caspase 3及caspase 9诱导前列腺癌PC3细胞凋亡

Sanggenon C induces apoptosis of prostate cancer PC3 cells by activating caspase 3 and caspase 9 pathways

目的探讨桑根酮C诱导雄激素非依赖型前列腺癌PC3细胞凋亡的作用及其可能机制。方法 MTT法检测桑根酮C对PC3细胞増殖的抑制作用:实验分6组,分别加入不同浓度的桑根酮C(0、1、5、20、50、100μmol/L),作用24 h检测细胞生长抑制率;20μmol/L桑根酮C加入PC3细胞,分别于0、6、12、24、48 h收集细胞,MTT法检测生长抑制率。流式细胞技术检测细胞凋亡率:20μmol/L桑根酮C加入PC3细胞,分别于0、12、24、48 h收集细胞检测凋亡率。荧光分光光度计检测caspase 3的活性:20μmol/L桑根酮C作用PC3细胞,分别在0、6、12、18、24、48 h收集细胞,检测caspases 3的活性。MTT法检测caspase 3、caspase 8及caspase 9抑制剂对桑根酮C抑制PC3细胞增殖的影响:实验分4组,分别加入DMSO、z-DEVD-fmk、z-LEHD-fmk及z-IETD-fmk,1 h加入桑根酮C,24 h收集细胞,MTT法计算细胞生长抑制率。结果桑根酮C能抑制PC3细胞的增殖,呈剂量、时间依赖性,桑根酮C 1、5、20、50、100μmol/L作用PC3细胞24 h的增值抑制率分别为:4.86%、12.92%、52.34%、82.05%、87.45%,1μmol/L组与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05),其他组与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。半数有效抑制浓度IC50为18.76μmol/L。20μmol/L桑根酮C作用PC3细胞,分别在6、12、24、48、72 h检测增值抑制率为:10.57%、27.09%、51.88%、80.73%、87.99%,与对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05)。20μmol/L桑根酮C可诱导PC3细胞的凋亡,在12、24、48 h的凋亡率分别为:7.43%、20.91%、37.56%,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。检测caspases 3的活性18 h比对照组增加了7.6倍,应用caspase抑制剂后发现caspase 3及caspase 9的抑制剂可显著逆转桑根酮C对PC3细胞增殖的抑制作用,抑制率从52.48%降到24.29%及28.81%,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01)。而caspase8抑制剂作用不明显,与对照组相比差异没有统计学意义(P>0.05)。结论桑根酮C可通过激活caspase 3及caspase 9途径诱导PC3细胞的凋亡。

Objective To investigate the effects of Sanggenon C in inducing apoptosis of prostate cancer PC3 cell line and explore the underlying mechanism.Methods The proliferation of PC3 cells treated for 24 h with 1,5,20,50,and 100 μmol/L sanggenon C or treated with 20 μmol/L Sanggenon C for 0,6,12,24 and 48 h was evaluated using MTT assay.Flow cytometry was performed for analysis of apoptosis of PC3 cells after exposure to sanggenon C with different treatment protocols,and the activity of caspase 3 was detected using spectrofluorometry.The inhibitory effect of sanggenon C on PC3 cells pretreated with DMSO,z-DEVD-fmk,z-LEHD-fmk or z-IETD-fmk for 1 h was detected by MTT assay.Results Sanggenon C inhibited the proliferation of PC3 cells in a dose-and time-dependent manner （P〈0.05 except for 1 μmol/L group） with a 24-h IC50of18.76 μmol/L.Sanggenon C at 20 μmol/L caused inhibition rates of PC3 cells of 10.57%,27.09%,51.88%,80.73% and 87.99%after treatment for 6,12,24,48,and 72 h,respectively （P〈0.05）,and resulted in apoptosis rates of 7.43%,20.91% and 37.56% at12 h,24 h and 48 h,respectively.Sanggenon C significantly increased caspase-3 activity in the cells,and its effect on PC3 cell proliferation was partially reversed by caspase 3 and caspase 9 inhibitors.Conclusion Sanggenon C can dose-dependently induce growth inhibition and apoptosis of PC3 cells possibly by activating caspase 9 and caspase 3 pathways.