摘要
目的 探讨脂氧素A4（lipoxin A4,LXA4）通过let-7c基因/转化生长因子 β1（transforming growth factor-β1,TGF-β1）信号通路保护高氧损伤小鼠肺上皮细胞MLE-12的作用机制.方法 体外传代培养MLE-12细胞,待其生长至接近融合状态时,随机分为高氧空白组、LXA4组、let-7c过表达组、let-7c沉默组、let-7c沉默＋LXA4组.各实验组均暴露于85%氧气中,LXA4组给予LXA4干预,let-7c过表达组和let-7c沉默组分别利用脂质体3000转染建立let-7c过表达或let-7c沉默细胞株.let-7c沉默＋LXA4组给予LXA4干预let-7c沉默细胞株.实时荧光定量聚合酶链反应检测细胞外基质,包括 α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）、Ⅰ型胶原（collagenⅠ,COL-Ⅰ）、TGF-β1信号通路及相关下游基因Smad 2、Smad 3、Smad 4、转化生长因子β1受体（TGF-βR1）、转化生长因子 β2受体（TGF-βR2）mRNA水平.Western blot检测TGF-β1信号蛋白Smad 2、Smad 3、Smad 4、p-Smad 2、p-Smad 3和TGF-βR1的表达.结果 LXA4组和let-7c过表达组细胞α-SMA、COL-Ⅰ、Smad 3、Smad 4、TGF-βR1、TGF-βR2 mRNA（＆#215;10-4）[LXA4组：（24.3±2.1）、（14.6±0.2）、（17.0±0.0）、（14.9±0.1）、（20.8±0.1）、（9.0±0.0）,let-7c过表达组：（12.2±0.5）、（3.0±0.0）、（3.1±0.0）、（9.6±0.4）、（28.5±0.2）、（7.6±0.1）]低于高氧空白组[（51.4±0.5）、（32.0±0.1）、（40.6±0.2）、（16.3±0.1）、（89.1±1.1）、（19.3±0.2）],let-7c沉默组和let-7c沉默＋LXA4组[let-7c沉默组：（87.3±7.0）、（38.5±0.3）、（48.0±0.2）、（56.5±0.2）、（126.0±0.9）、（33.1±1.0）,let-7c沉默＋LXA4组：（144.5±12.9）、（86.3±3.0）、（91.5±4.7）、（86.5±3.3）、（109.0±4.5）、（45.6±1.6）]高于高氧空白组;LXA4组和let-7c过表达组细胞Smad 2、Smad 3、Smad 4、p-Smad 2、p-Smad 3、TGF-βR1蛋白低于高氧空白组,let-7c沉默＋LXA4组p-Smad 2、p-Smad 3高于高氧空白组,差异均有统计学意义（P〈0.05）.结论 LXA4可能通过let-7c/TGF-β1信号通路发挥对高氧损伤小鼠肺上皮细胞的保护作用.
Objective To study the protective mechanisms of lipoxin A 4 （ LXA4 ） for hyperoxia-induced lung injury through modulation of let-7c/TGF-β1 signal pathway in mice.Method MLE-12 cells was transfected with let-7c mimic, mimic negative control （ NC） , let-7c inhibitor and inhibitor NC.The cells were assigned into hyperoxia group , LXA4 group, let-7c over-expression group, let-7c silence group, let-7c silence＋LXA4 group, and all exposed to 85% oxygen.The mRNA level of the extracellular matrixα-smooth muscle actin （α-SMA） and collagen Ⅰ（ COL-Ⅰ） , and the expression of related genes in TGF-β1 signaling pathway （Smad 2, Smad 3, Smad 4, TGF-βR1, TGF-βR2） were examined using qPCR.The protein expressions in TGF-β1 signaling pathway was examined using Western blot .Result The mRNA expressions of α-SMA, COL-Ⅰ, Smad 3, Smad 4, TGF-βR1 and TGF-βR2 in LXA4 group [（24.3 ±2.1）, （14.6 ±0.2）, （17.0 ±0.0）, （14.9 ±0.1）, （20.8 ±0.1）, （9.0 ±0.0） ] and let-7c over-expression group [ （ 12.2 ±0.5 ） , （ 3.0 ±0.0 ） , （ 3.1 ±0.0 ） , （ 9.6 ±0.4 ） , （ 28.5 ±0.2 ） , （ 7.6 ± 0.1）] were decreased comparing with the hyperoxia group [（51.4 ±0.5）, （32.0 ±0.1）, （40.6 ±0.2）, （16.3 ±0.1）, （89.1 ±1.1）, （19.3 ±0.2）].These expressions were increased in both let-7c silence group [（87.3 ±7.0）, （38.5 ±0.3）, （48.0 ±0.2）, （56.5 ±0.2）, （126.0 ±0.9）, （33.1 ±1.0）] and let-7c silence ＋LXA4 group [（144.5 ±12.9）, （86.3 ±3.0）, （91.5 ±4.7）, （86.5 ±3.3）, （109.0 ±4.5）, （45.6 ±1.6）].The protein levels of Smad 2, Smad 3, Smad 4, p-Smad 2, p-Smad 3 and TGF-βR1 of LXA4 group and let-7c over-expression group were decreased comparing with the hyperoxia group, while p-Smad 2, p-Smad 3 of let-7c silence＋LXA4 group were increased（P〈0.05）.Conclusion LXA4 may play a protective role through let-7c /TGF-β1 signal pathway of lung epithelial cells for hyperoxia-induced lung injury in mice .
基金
国家自然科学基金（81300521）
江苏省六大高峰人才项目（WSN-090）
