遗传性凝血因子Ⅶ与X联合缺陷症的分子发病机制研究

目的对1个遗传性凝血因子Ⅶ（FⅦ）与因子Ⅹ（FⅩ）联合缺陷症患者进行表型及F7与F10基因突变检测，探讨其分子发病机制。方法2016年7月12日温州医科大学附属第一医院妇科门诊收治1例48岁子宫肌瘤患者。采集先证者及其家系成员（共3代8人）外周静脉血标本，采用一期凝固法检测其凝血酶原时间（PT）、活化部分凝血活酶时间（APTT）、血浆FⅦ活性（FⅦ：C）、FⅩ活性（FⅩ：C）等凝血指标，ELISA法检测FⅦ抗原（FⅦ：Ag）和FⅩ抗原（FⅩ：Ag）；用DNA直接测序法分析先证者F7、F10基因的全部外显子、侧翼、5′和3′非翻译区及家系成员相应的突变位点区域，用反向测序证实所发生的突变；采用生物信息学预测软件（SIFT和PolyPhen－2）分析突变对蛋白质功能的影响；以蛋白质数据库（Protein Data Bank）中提供的三维结构（PDB ID：FⅦ，1dan；FⅩ，1xka）为模型，用Swiss－pdbViewer软件程序分析突变位点对FⅦ及FⅩ蛋白分子内氨基酸相互作用的影响。结果先证者的PT（17.2 s）和APTT（52.4 s）延长，FⅦ：C、FⅦ：Ag与FⅩ：C、FⅩ：Ag下降，分别为42%、55%与35%、43%；母亲、女儿的FⅩ：C分别为40%和42%及FⅩ：Ag分别为43%和47%；父亲、大哥的FⅦ：C、FⅦ：Ag均下降至正常对照的一半左右。测序发现先证者的F7基因第8外显子的c.1238G〉A杂合突变导致Arg353Gln多态性，F10基因第4外显子的c.361T〉C杂合突变导致Cys81Arg错义突变；父亲、大哥存在F7基因的Arg353Gln多态性及母亲、女儿存在F10基因Cys81Arg错义突变。生物信息学软件预测结果表明Cys81Arg错义突变可影响蛋白质的功能。蛋白模型分析发现：FⅩ蛋白第81位不带电荷的Cys被带正电荷的Arg取代后，其Cys81与Cys72间的二硫键消失，并且产生空间位阻效应；FⅦ蛋白第353位带正电荷的Arg被不带电荷的Gln取代后，Arg353与Tyr352间的氢键消失。结论该遗传性凝血因子Ⅶ与Ⅹ联合缺陷症家系先证者的F7基因存在Arg353Gln多态性及F10基因存在Cys81Arg杂合错义突变，且分别遗传自父亲和母亲。F10基因Cys81Arg为国际上鲜见报道的突变，其和F7基因Arg353Gln多态性与该家系的FⅩ和FⅦ水平降低有关。（中华检验医学杂志，2018, 41：66－69）