丙泊酚对野百合碱诱导大鼠肺动脉高压血管紧张素转化酶2的影响

Effect of propofol on angiotensin converting enzyme 2 in monocrotaline induced pulmonary hypertension in rats

目的观察丙泊酚对野百合碱（MCT）诱导大鼠肺动脉高压血管紧张素转化酶2（ACE2）的影响，并探讨其作用机制。方法采用随机数字表法将32只SD大鼠平均分为4组（n＝8）：对照组、MCT组、丙泊酚组、丙泊酚＋Mas抑制剂A779组，后3组腹腔注射60 mg/kg MCT（对照组注射等量生理盐水）诱导后，后两组每日分别持续注射丙泊酚10 μmol/L、丙泊酚10 μmol/L和A779（浓度为2 mg/ml），前两组注入等量生理盐水；4周后测量大鼠平均肺动脉压（mPAP），肺组织苏木素-伊红（HE）染色分析肺动脉中膜厚度指数（WT）及肺小动脉梗阻程度；Western blot检测肺组织内ACE2、Mas、磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）、磷酸化内皮型一氧化氮合酶（p-eNOS）表达水平；酶联免疫吸附试验（ELISA）检测肺组织内血管紧张素1-7[Ang-（1-7）]水平；硝酸还原酶法检测肺组织内一氧化氮（NO）浓度。结果对照组、MCT组、丙泊酚组、丙泊酚＋A779组大鼠的mPAP分别为（11.37±2.17）、（32.43±4.22）、（15.82±2.12）、（18.13±2.31） mmHg（1 mmHg＝0.133 kPa），WT分别为（15.63±11.12）%、（78.01±17.40）%、（22.64±12.95）%、（63.67±16.43）%。与对照组比较，丙泊酚组、丙泊酚＋A779组大鼠mPAP稍升高（P＝0.001，P＝0.005），而MCT组显著升高（P＝0.000）；对照组肺动脉血管无明显狭窄、MCT组管腔基本闭塞、丙泊酚组管腔基本正常、丙泊酚＋A779组管腔明显增生；与MCT组比较，对照组、丙泊酚组大鼠WT显著降低（P＝0.003，P＝0.002），与丙泊酚组比较，丙泊酚＋A779组大鼠WT明显升高（P＝0.000）。丙泊酚组及对照组中ACE2、Mas、p-Akt、p-eNOS较MCT组明显升高（丙泊酚组及对照组与MCT组比较，均P＝0.000）。丙泊酚＋A779组大鼠肺组Mas表达水平较丙泊酚组明显下降（P＝0.005）。ELISA法检测各组大鼠肺组织Ang-（1-7）水平表达：丙泊酚组[（75.31±6.51） pg/ml]和对照组[（81.75±5.80） pg/ml]较MCT组[（34.55±5.72 ） pg/ml]明显升高（均P＝0.000）。丙泊酚＋A779组[（41.14±8.03） pg/ml]较丙泊酚组[（75.31±6.51） pg/ml]明显下降（P＝0.000）。硝酸还原酶法检测大鼠肺组织NO含量：丙泊酚组[（6.17±0.90） μmol/g]及对照组[（6.70±0.84） μmol/g]较MCT组[（2.83±0.82） μmol/g]明显增加（均P＝0.000）。丙泊酚＋A779组[（2.99±0.98） μmol/g]较丙泊酚组[（6.17±0.90） μmol/g]明显降低（P＝0.000）。结论丙泊酚可以通过调节肺动脉高压中ACE2来抑制肺动脉高压的发展，该作用可能与激活ACE2-Ang-（1-7）-Mas轴，继而激活下游Akt/eNOS信号通路有关。

Objective To investigate the effect of propofol on angiotensin converting enzyme 2 （ACE2） in rats with monocrotaline （MCT）-induced pulmonary arterial hypertension, and the action mechanism.Methods Stochastic indicator method is used on average only 32 SD rats can be divided into four groups （n=8）： control group, MCT group, propofol group, propofol group ＋ A779, after intraperitoneal injection of three groups of 60 mg/kg MCT amount of saline injection （control group） after induction, two groups of daily for an injection of propofol respectively after 10 μmol/L, propofol 10 μmol/L and A779 （concentration of 2 mg/ml）, the former two groups of injection amount of normal saline; 4 weeks after measuring the rat mean pulmonary artery pressure （mPAP）, lung tissue hematoxylin and eosin （HE） staining analysis of film thickness index （WT） in pulmonary artery and pulmonary small artery obstruction degree; Western blotting detection ACE2 in lung tissue, Mas, phosphorylated protein kinase B （p-Akt）, phosphorylated endothelial nitric oxide synthase （p-eNOS） expression level; enzyme linked immunosorbent assay （ELISA） to detect lung tissues angiotensin 1-7 [Ang-（1-7）].Results Blank control group, model group （MCT）, propofol group, propofol ＋ A779 rat mPAP were （11.37±2.17）, （32.43±4.22）, （15.82±2.12）, （18.13±2.31） mmHg （1 mmHg=0.133 kPa）, WT are respectively （15.63±11.12）%, （78.01±17.40）%, （22.64±12.95）%, （63.67±16.43）%. Compared with blank control group, propofol group, propofol ＋ A779 rats mPAP slightly elevated （P=0.001, P=0.005）, while the MCT group increased significantly （P=0.000）; Pulmonary vascular blank control group, model group, no obvious narrowed lumen basic block, the basic normal lumen propofol group, propofol group ＋ A779 lumen obvious hyperplasia; Compared with MCT group, blank control group, propofol group rats WT significantly reduced （P=0.003, P=0.002）, compared with propofol group, propofol ＋ A779 group rats WT significantly increased （P=0.002）. ACE2 in propofol group and blank control group, Mas, p-Akt, p-eNOS increased significantly in the model group （propofol group compared with model group and blank control group, P=0.000）. Propofol ＋ A779 rat lung group Mas expression level and decreased obviously in the propofol group （P=0.000）. ELISA method to detect each group of rat lung tissue Ang-（1-7） levels： propofol group （75.31±6.51） pg/ml and blank control group （81.75±5.80） pg/ml （34.55±5.72） in the model group pg/ml increased significantly （P=0.000）. Propofol ＋ A779 group （41.14±8.03） pg/ml （75.31±6.51） in the propofol group pg/ml and significantly decreased （P=0.000）. Nitrate reduction method to detect the contents of rat lung tissue NO： propofol group （6.17±0.90） μmol/g and the blank control group （6.70±0.84） μmol/g compared with model group （2.83±0.82） μmol/g increased significantly （P=0.000）. Propofol ＋ A779 group （2.99±0.98） μmol/g （6.17±0.90） μmol/g in the propofol group decreased obviously （P=0.000）.Conclusion Propofol can adjust the ACE2 to suppress the development of pulmonary hypertension in pulmonary hypertension, the effect may be related to activation of ACE2-Ang-（1-7）-Mas shaft, which in turn activated Akt/eNOS downstream signaling pathways.