肠道病毒71型免提取核酸的荧光RT-PCR检测方法的建立及应用

目的建立肠道病毒71型(EV 71型)免提取核酸的荧光RT-PCR检测方法。方法根据EV 71型VP1基因保守序列设计高特异性、高保守性的引物和探针,运用设计序列和缓冲液建立一种免提取核酸的荧光RT-PCR检测方法,并与传统RT-PCR方法进行比较。结果本研究建立的方法能够检测出EV 71型病毒株和EV 71型核酸标准品,而对柯萨奇病毒A4、A6、A10、A24型和诺如病毒、肠道腺病毒、札如病毒、麻疹病毒、风疹病毒的扩增均为阴性,阴性对照结果中无非特异性扩增和无假阳性结果。灵敏度检测结果显示,对EV 71型核酸标准品最低检测浓度为6.13×102copies/μL,灵敏度标准曲线为y=-3.329 8x+41.571(r=0.999 4)。对临床样本检测结果显示,本研究方法与传统RT-PCR检测方法检测结果的Kappa值为0.82,一致性强度等级为最强。结论本研究建立的EV 71型免提取核酸荧光RT-PCR检测方法特异性强、灵敏度高,适用于EV 71型的临床样本筛选分析。