鞘氨醇激酶1对人骨肉瘤U2OS细胞增殖、凋亡的影响及机制

目的探讨鞘氨醇激酶1(Sph K1)对人骨肉瘤U2OS细胞增殖和凋亡的影响及机制。方法将体外培养的人骨肉瘤U2OS细胞随机分为四组,转染组、Vector组分别转染Sph K1 siRNA及对照siRNA,PF-543组在培养液中加入1μmol/L Sph K1特异性抑制剂PF-543,对照组常规培养。干预48 h时,采用Western blotting法检测Sph K1蛋白表达,明确siRNA转染可在蛋白水平抑制骨肉瘤U2OS细胞Sph K1高表达,且效果与其抑制剂PF-543相当。采用MTT法检测各组细胞存活率,采用TUNEL法和流式细胞术检测细胞凋亡率,采用Western blotting法检测增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、Bax、Bcl-2、Caspase-3及活化的Caspase-3(cleaved Caspase-3)蛋白表达。结果与对照组、Vector组比较,转染组、PF-543组细胞存活率均下降,细胞凋亡率均增加,PCNA、Cyclin D1、Bcl-2蛋白表达均减低,Bax、Caspase-3及cleaved Caspase-3蛋白表达均增加,组间比较P均<0.05。结论 Sph K1基因可促进骨肉瘤细胞增殖、抑制细胞凋亡,调节凋亡及增殖相关因子表达可能是其作用机制。