表达IP10基因重组新城疫病毒的拯救

目的拯救携带IP10基因的重组新城疫病毒(r NDV-IP10)。方法用重组酶将IP10基因插入r NDV质粒,将重组BRN-FL-IP10质粒和辅助质粒共转染稳定表达T7RNA聚合酶的BSR-7细胞进行病毒拯救。用鸡红细胞检测重组病毒的血凝效价;用NDV及r NDV分别感染鸡胚成纤维细胞,检测病毒的生长动力学;用NDV及r NDV分别感染乳仓鼠肾细胞(BHK-2细胞),间接免疫荧光技术检测IP10蛋白的表达;将r NDV-IP10重组病毒感染人肝癌细胞低转移株(MHCC-97L),Western blotting法检测细胞中IP10蛋白表达。结果鸡红细胞血凝效价为阳性,重组病毒r NDV-IP10的生长特征与亲本NDV相比相似。感染了r NDV-IP10的BHK-2细胞具有特异性荧光,感染了r NDV-IP10的MHCC-97L细胞具有特异性条带。结论成功拯救出能够表达IP10基因的重组病毒r NDV-IP10。