ONECUT1重组质粒构建及其对细胞应激相关基因表达的影响

目的构建ONECUT1重组质粒,并探讨其重组对细胞应激相关基因表达的影响。方法用重组DNA技术及RT-PCR法体外构建人源ONECUT1-pc DNA3.1(-)表达质粒,并测序。将培养好的U251细胞随机分为转染组、空载组,分别转染ONECUT1重组质粒及空载质粒。采用qRT-PCR法检测两组细胞内线粒体抗氧化应激相关基因(SOD1、CAT、GPX1、PRDX1、SIRT1、NQO1、Gc Lm、Gc Lc、NRF2、KEAP1、PARK7)及内质网应激相关基因(MANF、PERK、IRE1α、ATF6)的表达。结果电泳结果显示,在DNA Marker 1 000~1 500 bp出现单带,即为插入的全部CDS序列,1 398 bp,测序证实质粒构建成功。与空载组比较,转染组线粒体抗氧化应激相关基因CAT、PRDX1、SIRT1、NQO1、Gc Lm、Gc Lc、PARK7表达上调(P均<0.05),SOD1、GPX1、NRF2、KEAP1表达差异无统计学意义(P均>0.05)。与空载组比较,转染组内质网应激相关基因MANF、IRE1α、PERK、ATF6表达差异无统计学意义(P均>0.05)。结论成功构建ONECUT1重组质粒,ONECUT1可使细胞内部分抗氧化应激相关基因表达上调,但对内质网应激相关基因的表达无影响。