虫草素对动脉硬化闭塞患者血管平滑肌细胞增殖及ERK1/2蛋白表达的影响

Effects of Cordyceps on the proliferation of vascular smooth muscle cells and the expression of ERK1/2 protein in patients with arteriosclerosis obliterans

目的观察虫草素对动脉硬化闭塞(ASO)患者下肢动脉原代培养血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖及PCNA、ERK1/2蛋白表达的影响,探索不同浓度虫草素对原代VSMC增殖影响的剂量-效应关系以及MAPK/ERK1/2信号通路在其中所发挥的作用。方法收集ASO患者下肢截肢标本分离动脉平滑肌,用贴壁法原代培养VSMCs。取生长较好的第4~8代VSMCs,培养到60%~70%时,换用无血清培养液饥饿培养24 h,使细胞同步于静止期。采用不同浓度虫草素(0、15、45、75、125、250μmol/L)单独或加入PD98059阻断MAPK/ERK1/2通路后联合使用不同浓度虫草素处理。用CCK-8法检测VSMCs增殖,Western blot测定PCNA、ERK1/2蛋白的表达。结果虫草素作用后的ASO患者VSMCs的增殖能力下降,并且随着药物浓度的增加,VSMCs增殖活力越低,差异有统计学意义(P<0.05)。虫草素对ASO组VSMCs增殖活力的影响基本上与未加PD98059阻断MAPK/ERK1/2信号通路时的结果相同。虫草素作用ASO组VSMCs 24 h后,细胞PCNA蛋白的表达下降,且随药物浓度的增加,表达越低(P<0.05);药物浓度在250μmol/L,ERK1/2蛋白表达下降,差异有统计学意义(P<0.05)。虫草素对ASO患者VSMCs的增殖活力、PCNA表达的影响不能被PD98059所抑制,差异无统计学意义(P>0.05);浓度在250μmol/L时,虫草素下调ASO组VSMCs ERK的表达,这一作用能被PD98059强化,差异有统计学意义(P<0.05)。结论虫草素对ASO患者VSMCs的异常增殖具有显著抑制作用,其发挥作用可能不止通过MAPK/ERK1/2信号通路进行传导,可能还存在其他相关机制。