利用定点突变及酶切方法制备分子量内标

分子量内标是STR分型时用来标定样品峰大小的重要内参,目前常用的内标如ABI公司LIZ500等都是采用PCR扩增的方法制备,这种方法制备的内标,由于引物二聚体的长度与内标中的小片段长度相近,不易于纯化,因此混有引物峰,容易在数据分析时产生误判,且不易于规模化生产。本实验采用定点突变技术结合酶切PCR产物的方法,制备了从50bp到500bp共14个片段的分子量内标,制备的产物没有引物峰等杂峰,且制备工艺适用于规模化生产,对获得的内标片段进行线性化分析,R值=0.9999,符合线性化要求,可以用作STR分型的分子量内标。