PolyCHb携氧复苏液影响失血性休克大鼠EPO表达的初步分析

Preliminary analysis of EPO expression PolyCHb resuscitates hemorrhagic shock rats as a oxygen carrier

目的采用PolyCHb携氧复苏液救治失血性休克大鼠,观察复苏效果并研究其对血浆EPO含量以及肾组织EPO,EPOR mRNA表达的影响,为休克复苏后氧供恢复状态及HBOCs制品开发提供评价依据。方法采用大鼠重度失血性休克-复苏模型,将64只成年雄性SD大鼠随机分为：1）假手术组：仅进行大鼠股动/静脉插管;2）PolyCHb组：大鼠股动/静脉插管,制备失血性休克模型,用PolyCHb复苏液进行复苏;3）红细胞组：用红细胞复苏液进行复苏,其余操作与PolyCHb组相同;4）白蛋白组：用5%白蛋白复苏液进行复苏,其余操作与PolyCHb组相同。在放血前（基础值）、休克时、复苏液回输完成（复苏后0 h）观察大鼠血压、心率变化,并进行血细胞计数;复苏后24 h和72 h分别取32只大鼠腹主动脉血,离心取血浆,测定血浆EPO含量;取大鼠肾组织,应用实时荧光定量PCR检测24h与72 h组织中EPO与EPOR mRNA的表达情况。结果 PolyCHb组、红细胞组和白蛋白组复苏后0 h MAP（mmHg）分别为（122.27±17.25）vs（98.38±18.70）、（90.93±11.58）（P〈0.001）;Hb（g/L）含量分别为（78.33±3.61）、（88.50±0.71）vs（64.83±9.72）（P〈0.05）;红细胞（1012/L）数量为（3.21±0.30）vs（4.78±0.38）vs（3.23±0.40）（P〈0.05）;复苏后24 h PolyCHb组、红细胞组组和白蛋白组血浆EPO蛋白含量（ng/m L）分别为（7.04±0.51）vs（2.86±0.60）vs（10.4±0.86）（P〈0.05）;肾组织EPO mRNA表达值分别为（32.43±3.25）vs（21.69±5.03）（P〈0.01）vs（35.17±17.10）（P〉0.05）;肾组织EPOR mRNA表达值分别为（0.20±0.04）vs（0.16±0.02）vs（0.24±0.05）（P〉0.05）;复苏后72 h PolyCHb组、红细胞组和白蛋白组血浆EPO蛋白含量（ng/m L）分别为（1.88±0.30）vs（0.79±0.19）vs（3.10±0.51）（P〈0.05）;肾组织EPO mRNA表达值分别为（9.76±2.50）vs（7.59±1.48）（P〉0.05）、（15.27±1.67）（P〈0.05）;肾组织EPOR mRNA表达值分别（0.32±0.06）vs（0.29±0.07）vs（0.30±0.15）（P〉0.05）。结论PolyCHb用于复苏重度失血性休克大鼠,通过给缺氧组织供氧,使血浆EPO水平及肾组织EPO mRNA表达降低,但对肾组织EPOR mRNA表达无明显影响。PolyCHb可能可作为1种新型携氧体,早期纠正急性失血性休克大鼠氧供平衡。

Objective To explore the effect of resuscitation of hemorrhagic shock rats with PolyCHb resuscitation,and study its effects of plasma erythropoietin and the expression of EPO,EPOR of renal tissue,and provide evaluation basis for the recovery of oxygen supply after shock recovery and development of HBOCs products. Methods 64 adult male SD rats were randomly divided into 1） Sham operation group femoral artery/vein intubation only. 2） PolyCHb group： rat femoral/venous cannula,resulting in hemorrhagic shock-resuscitated model,with PolyCHb resuscitation; 3） Erythrocyte group： resuscitated with red blood cell resuscitation,the remaining operation is the same as PolyCHb group; 4） Albumin group： resuscitated with 5% albumin recovery fluid,and the remaining operation was the same as PolyCHb group. In the pre-bleed,in shock,the resuscitations were done to see the blood pressure,the heart rate,and the blood count; After the recovery of 24 h and 72 h,32 rats were taken from the abdominal aorta blood,and the plasma was centrifuged to determine the plasma EPO content. Rat kidney tissue was used to detect the expression of EPO and EPOR mRNA in 24 h and 72 h tissues using realtime fluorescence quantitative PCR assays. Results 0 h MAP（mm Hg） of the PolyCHb group,Erythrocyte group and Albumin group were respectively（122. 27±17. 25） vs（98. 38±18. 70） 、（90. 93±11. 58）（P〈0. 001）. The content of Hb（g/L）was（78. 33±3. 61） 、（88. 50±0. 71） vs（64. 83±9. 72）（P〈0.05）; Number of red blood cells（1012/L） was（3. 21±0. 30）vs（4. 78±0. 38） vs（3. 23±0. 40）（P〈0.05）; The plasma EPO protein content（ng/m L） of 24 h poly CHb group,Erythrocyte group and Albumin group was（7. 04±0. 51） vs（2. 86±0. 60） vs（10. 4±0. 86）（P〈0.05）; The expression values of EPO mRNA in renal tissue were（32. 43 ± 3. 25） vs（21. 69 ± 5. 03）（P〈0. 01） vs（35. 17±17. 10）（P〉0. 05）;The expression values of EPOR mRNA of renal tissue were（0. 20±0. 04） vs（0. 16±0. 02） vs（0. 24±0. 05）（P〉0.05）; The plasma EPO protein content（ng/m L） of 72 h PolyCHb group,Erythrocyte group and Albumin group was（1. 88±0. 30） vs（0. 79±0. 19） vs（3. 10±0. 51）（P〈0.05）; The expression values of EPO mRNA in renal tissues were（9. 76 ± 2. 50） vs（7. 59 ± 1. 48）（P〉0. 05） 、（15. 27 ± 1. 67）（P〈0. 05）; The expression values of EPOR mRNA in renal tissue were（0. 32 ± 0. 06） vs（0. 29 ± 0. 07） vs（0. 30 ± 0. 15）（P〉0. 05）. Conclusion PolyCHb used for recovery of severe uncontrolled hemorrhagic shock rats,by giving oxygen to hypoxia group,the plasma EPO level and kidney EPO mRNA expression is reduced,but the kidney tissues EPOR mRNA expression had no obvious effect. PolyCHb can be used as a new type of oxygen-carrying body to correct oxygenation in acute hemorrhagic shock.