干制辣椒InDel-PCR反应体系的构建及应用

Construction and application of InDel-PCR system of dry pepper

以干制辣椒叶片为试验材料,筛选适用于InDel-PCR(insertion-deletion-PCR)的DNA提取方法。采用单因素试验设计,对干制辣椒InDel-PCR反应体系进行优化,以及建立干制辣椒InDel的最佳反应体系和扩增程序,利用构建的InDel-PCR反应体系对InDel引物进行筛选。结果表明:植物基因组试剂盒较改良十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法提取的DNA质量高、杂质少,更适合InDel-PCR的应用;适用于干制辣椒的InDel-PCR反应体系总体积为15μL,其中模板DNA 2.0μL,正反向引物各1.0μL,2×Go Taq R Colorless Master Mix 7.5μL,其余用dd H2O补齐。扩增程序:94℃预变性5 min;94℃变性30 s,56℃退火30 s,72℃延伸45 s,30次循环;72℃延伸5 min。在上述PCR条件下从60对InDel引物中筛选出25对多态性好、稳定性高的引物。