用疏水色谱复性并同时纯化蛋白质的机理及其应用

变性蛋白表面的疏水氨基酸残基有与疏水色谱固定相（STHIC）颗粒相互作用的倾向,两者之间的疏水相互作用能够抑制变性蛋白分子间的相互聚集.同时疏水色谱固定相还能在分子水平上给变性蛋白分子提供足够高的能量,使其瞬时脱水并折叠成其天然构象或不同的折叠中间体.变性蛋白在疏水界面上的折叠不仅取决于其氨基酸之间的特异性相互作用及疏水色谱固定相的结构,而且还取决于固定相和流动相之间的协同作用.同时,还提出了高效疏水相互色谱（HPHIC）进行蛋白折叠的机理及其进行蛋白折叠时能实现质量控制的原理.在适当的色谱条件下,HPHIC可使几种变性蛋白一步实现复性及同时纯化.此外,还设计制造出了直径比柱长大得多的实验室型和制备型“变性蛋白复性及同时纯化装置,USRPP”,该“装置”具有完全除去变性剂、使蛋白质复性,与杂蛋白分离及易于回收变性剂的“一石四鸟”功能.该“装置”对变性蛋白的复性和纯化效率与通常使用的长柱相当.在制备规模情况下,该“装置”可以在低压梯度条件下简便、快速、而经济地应用于重组蛋白药物的制备.文中以重组人干扰素-γ为例,说明了制备型“装置”在其复性及同时纯化生产工艺中的应用.