麻鸭钙非依赖性磷脂酶A2ε(iPLA2ε)的克隆和表达纯化

Cloning,expression and purification of sheldrake calcium-independent phospholipase A2ε(iPLA2ε)

肉品风味与肌内磷脂的水解密切相关,磷脂酶A2对肌内磷脂的水解起主导作用,其中钙非依赖性磷脂酶A2ε(i PLA2ε)是重要的一种。采用逆转录PCR技术,从麻鸭肌肉中克隆到i PLA2ε的编码基因。该基因开放阅读框长1 425 bp,编码474个氨基酸,分子量约为54 ku,理论等电点为7.86。生物信息学分析表明,i PLA2ε蛋白含有2个明显的跨膜区,为疏水性膜蛋白;i PLA2ε的氨基酸序列包含1个Patatin样磷脂酶结构域,该结构域中含有保守的丝氨酸-天冬氨酸催化水解二元体。采用大肠杆菌p Cold1表达系统构建i PLA2ε基因的重组表达质粒,并在i PLA2ε基因的5'端连接大肠杆菌mal E基因,该基因编码的麦芽糖结合蛋白能提高在原核中过量表达的真核融合蛋白的溶解性,最终在大肠杆菌中实现了i PLA2ε的可溶性表达。结果显示,利用蛋白C端的组氨酸标签亲和纯化法及凝胶过滤层析法获得了i PLA2ε的纯化蛋白,表明该研究为进一步研究肉品中i PLA2ε的功能奠定了工作基础。