基于新型小鹅瘟病毒VP3基因间接ELISA快速检测方法的建立

应用PCR方法扩增了新型鹅细小病毒(NGPV)的VP3基因,然后将其克隆到原核表达载体中,获得重组质粒p GEX-VP3。将p GEX-VP3转化到DH5α感受态细胞中,诱导表达后分别用SDS-PAGE和Western-blot对表达产物进行分析和鉴定。然后以表达的VP3蛋白作为抗原,包被ELISA板。分别对包被抗原的浓度、抗原封闭条件、血清的孵育条件、酶标二抗的孵育条件等进行优化,最终成功建立间接ELISA。VP3蛋白的包被稀释度为1:800,4℃包被过夜,5%脱脂乳4℃封闭过夜,血清稀释度为1:120,酶标二抗稀释度为1:1000,孵育时间为30min。此方法有良好的重复性及特异性,为临床检测新型细小病毒感染以及疫苗评价提供了参考方法。