祛风生脉颗粒对大鼠缺血心肌微血管内皮细胞自噬及血管新生的影响

目的观察祛风生脉颗粒对大鼠缺血心肌微血管内皮细胞(CMECs)自噬及血管新生的影响。方法制备祛风生脉颗粒高剂量(Q-G组)、中剂量(Q-Z组)、低剂量(Q-D组)大鼠含药血清,分别与大鼠缺血CMECs共孵育,同时制备空白血清,分别与大鼠缺血CMECs(MX组)和正常大鼠CMECs(ZC组)共孵育。电镜观察各组细胞自噬小体及超微结构变化,Western-blot分析微管蛋白轻链3(LC3)–Ⅱ/Ⅰ比值及P62蛋白表达;划痕法观察细胞迁移能力,倒置相差显微镜下计数管腔形成数。结果与ZC组相比,MX组电镜下观察到自噬小体,但未见到自噬溶酶体,LC3–Ⅱ/Ⅰ比值及P62蛋白表达均升高(P <0.05),细胞迁移数和管腔形成数均较ZC组降低(P <0.05);与MX组相比,Q-D组和Q-Z组电镜下观察到自噬小体增多,同时观察到较多的自噬溶酶体,LC3–Ⅱ/Ⅰ比值升高,P62蛋白表达降低(P <0.05),细胞迁移数和管腔形成数均较MX组增多(P <0.05);与Q-D组和Q-Z组相比,Q-G组电镜下观察到自噬溶酶体数目进一步增多;与MX组相比,Q-G组LC3–Ⅱ/Ⅰ比值显著升高,P62蛋白表达明显降低(P <0.01),细胞迁移数和成管数较MX组均显著增多(P <0.01)。结论祛风生脉颗粒能改善缺血CMECs迁移和成管能力,从而促进缺血心肌血管新生,其作用与药物剂量呈正相关,机制可能与增强缺血CMECs自噬有关。