H9N2亚型AIV双重RT-PCR检测方法的建立

Establishment of a double RT-PCR detection method for H9N2 subtype avian influenza virus

为H9N2亚型AIV进行快速、准确鉴定与诊断,根据H9N2亚型禽流感病毒的HA、NA基因各设计1对引物,建立了一种对2个表面基因同时进行扩增的双重RT-PCR检测方法。HA、NA基因预期扩增的目的片段长度分别为700、423 bp。通过对H9N2亚型禽流感病毒不同稀释度的尿囊液进行检测,证实病毒尿囊液的最低检出量为1×10^(4.25) EID_(50)/100μL。采用该方法对H1～H15和N1～N9等亚型流感病毒及新城疫病毒等进行检测,结果只有H9N2亚型AIV出现2个特异性目的条带,与其他常见禽病病原无交叉反应;用建立的双重RT-PCR和病毒分离2种方法同时对送检样品进行检测,结果2种方法的符合率达99.77%,说明该检测方法特异性强、敏感性较高,在临床诊断和流行病学调查方面具有较好的应用前景。