基于PEDV N蛋白双抗体夹心ELISA检测方法的建立

为了建立猪流行性腹泻(procine epidemic diarrhea,PED)快速病原学诊断方法,试验用纯化的猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)免疫Balb/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合筛选阳性杂交瘤细胞,并进行间接免疫荧光试验。在此基础上,以单克隆抗体(MAb)为包被抗体,PEDV阳性猪源多克隆抗体(PcAb)为检测抗体建立检测PEDV抗原的双抗体夹心ELISA(DAS-ELISA)方法,并检测了该方法的特异性、灵敏度、重复性,以及与RT-PCR方法的符合率。结果表明:试验成功筛选到一株能够稳定分泌抗PEDV的MAb 13C3A10-2;通过间接免疫荧光试验鉴定,该MAb为PEDV型特异性MAb;建立的DAS-ELISA方法针对猪传染性胃肠炎病毒、猪德尔塔冠状病毒和猪轮状病毒的检测结果均为阴性;对PEDV CV777细胞毒的最低检出量为5×10^3 TCID(50)/mL;具有良好的重复性,组内变异系数为4.57%~7.81%,组间变异系数为4.78%~7.36%;DAS-ELISA与RT-PCR比较,阳性符合率为94.7%。说明试验建立的PEDV DAS-ELISA方法可以初步用于PED病原学诊断。