大鼠成肌细胞缺血再灌注损伤模型的建立与验证

目的建立和验证L6大鼠成肌细胞缺血再灌注损伤(IRI)的细胞模型.方法2018年6月至2019年1月,诱导分化培养L6大鼠成肌细胞,以镜下观察肌管出现和考马斯亮蓝染色观察肌性结构出现来确定L6大鼠成肌细胞株分化完成;将诱导后的L6大鼠成肌细胞利用随机数字表法分为对照组、缺氧孵箱培养组和连二亚硫酸钠培养组.分别利用缺氧孵箱和含有连二亚硫酸钠培养基建立骨骼肌缺血再灌注损伤模型;CCK-8法测定细胞活性,利用相关试剂盒测定细胞内超氧化物歧化酶(SOD)、黄嘌呤氧化酶(XOD)、细胞内Ca2+浓度和上清液中乳酸脱氢酶(LDH)含量,对模型进行验证和统计学分析.P<0.05为差异有统计学意义.结果诱导分化后的L6大鼠成肌细胞出现肌管结构,考马斯亮蓝染色下肌性结构明显;与对照组相比,缺氧孵箱培养组和连二亚硫酸钠培养组细胞上清液中LDH含量增加,3组分别为(30.00±2.96)U/mg、(230.51±36.23)U/mg和(207.39±42.84)U/mg,差异有统计学意义(P<0.05);细胞内XOD含量增加,3组分别为(60.24±5.18)U/mg、(235.89±21.32)U/mg和(219.53±30.41)U/mg,差异有统计学意义(P<0.05);细胞内Ca2+浓度增加,分别是对照组的(1.83±0.53)倍和(2.05±0.73)倍(P<0.05);SOD降低,3组分别为(194.86±10.25)U/mg、(51.13±8.42)U/mg和(47.16±9.57)U/mg(P<0.05);与连二亚硫酸钠培养组细胞活性[(53.41±9.65)%]相比,缺氧孵箱培养组[(72.54±5.86)%]细胞活性更高(P<0.05).结论利用缺氧孵箱培养诱导分化的L6大鼠成肌细胞可能是一种较真实的骨骼肌IRI细胞模型.