脐带间充质干细胞源外泌体分离纯化的方法改良

Improvement of isolation and purification of exosomes from umbilical cord mesenchymal stem cells

目的改良脐带间充质干细胞来源外泌体(UCMSC-exo)分离纯化方法。方法外泌体经低温超离法初步分离后,qEV柱进一步纯化,透射电镜(TEM)观察其生物学形态,流式检测其表面标记物,NTA检测其粒径分布。结果改良前后的外泌体形态均为典型的双层膜结构,但改良后染色背景单一;外泌体表面标志物CD63和CD81阳性率改良前分别为69.3%和89.8%;改良后分别为88.3%和92.9%,改良后阳性率有所提高,但差异不显著(P>0.05)。改良前外泌体粒径为58.77~396.1nm,主峰为158.4nm,平均粒径134.5nm,分布系数(PDI)为0.148,20~200nm的exo百分比为78.9%;改良法后粒径为58.77~396.1nm,主峰为159.1nm,平均粒径137.1nm,PDI为0.132,20~200nm的exo百分比为78.7%,改良法后外泌体的粒径分布范围、主峰值及PDI值比较无显著变化(P>0.05)。结论低温超高速离心分离后加用qEV柱纯化,可去除UCMSC-exo杂蛋白,且不影响其得率、粒径分布和阳性标志物。