高压液相色谱仪测定HbA2 HbF的影响因素分析

目的:探究高效液相色谱仪测定HbA2/HbF的影响因素的定性定量指标。方法:选取40例血红蛋白病检测样本。根据采集顺序的不同,将其分为1、2两个组进行有效研究。测定人全血中HbA2/HbF的百分含量。并结合实际情况,分析洗脱时间,峰形的测值的影响因素。使用D-10 Dual Program仪器的地中海地贫模式,采用高效液相色谱仪测定(HPLC)方式检测。一组使用直接上样的方式,另外一组使用的是血红蛋白液上样。结果:样本条件的影响,一部分全血使用的是全血上样的模式1:300的比例稀释,一部分是以1:200比例稀释样血红蛋白液的模式进行上样,进行分析。检验证明,1:200的比例的血红蛋白上样中,上样分析效果明显优于1:300的比例的全血样本。以上检验需要控制面积需要保持在100000~4000000μvolt.范围内,避免堵塞情况呈现。并且峰值过饱和情况的检测是不精确的,需用碱变性试验进行验证,或者需倍比稀释或梯度稀释样本再行测定。异常血红蛋白病的峰形图会有特征性变化,比如:时间处于0.37min的时候,unknown的数值,血红蛋白S-Window值等就会呈现。两组资料的基本情况无明显差异(P<0.05)。结论:样本稀释度的大小,直接影响了地中海贫血模式横扫面积,并影响了HbA2/HbF的测定值。峰值过饱和的情况下,需用碱变性法进行验证。并且对异常血红蛋白病峰形的观察,可以对地贫基因的探究起到一个较好的提示性作用。