黄芪甲苷诱导人支气管上皮细胞β-防御素-2表达的初步研究

目的初步探讨黄芪甲苷能否诱导人支气管上皮细胞(human bronchial epithelial cells,HBECs)表达β-防御素-2(human β-defensin 2,hBD-2)及其生成机制。方法 CCK-8确定黄芪甲苷对HBECs毒性的影响。实时定量聚合酶链反应(Real-time Quantitative Polymerase chain reaction,qPCR)检测黄芪甲苷在不同浓度(0、12.5、25、50、100、200 μM)及不同时间(0、1、6、12、24、48 h)下诱导HBECs表达hBD-2 mRNA的水平。qPCR及酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测在NF-κB、JAK2、PI3K抑制剂预先处理下黄芪甲苷诱导hBD-2 mRNA表达及蛋白分泌水平的变化。经黄芪甲苷处理后,免疫荧光检测NF-κB核转位情况,免疫印迹检测HBE细胞内STAT3、Akt磷酸化水平。结果黄芪甲苷在0~200 μM浓度范围内对HBECs无明显毒性作用。黄芪甲苷诱导hBD-2 mRNA表达水平随药物浓度而增加,并具有时间依赖性,24 h为最佳干预时间。在NF-κB、JAK2、PI3K抑制剂预先处理下,黄芪甲苷诱导hBD-2 mRNA及蛋白水平均下降。黄芪甲苷刺激HBECs 30 min后,可见胞浆内NF-κB/p65转位至细胞核内,180 min时STAT3明显磷酸化,120 min时Akt明显磷酸化。结论黄芪甲苷诱导HBECs生成hBD-2具有时间和浓度依赖性,且该诱导作用通过JAK2-STAT3、PI3K/Akt和NF-κB信号通路。