基于蠕形螨几丁质合成酶基因的PCR-RFLP及序列进化分析

检测33份来自上海地区的蠕形螨病犬毛囊样品,其中能成功检测出几丁质合成酶基因16株,与参考序列比对结果显示,16株样本株出现6类序列,其中9株没有发生突变,所有序列之间同源性在99.7%~99.9%,与其他参考株同源性在98.2%~100%之间。基于几丁质合成酶基因序列的遗传进化分析显示,6类序列分为2组,其中第3类序列单独为1组,第1、2、4、5、6类序列与日本、印度、陕西株为1个组。利用Cfr13I、BSPT1、HinfI、Eco131I对6类序列的扩增产物进行酶切,Cfr13I酶切可将第3类序列与其他序列区分开来,HinfI和BSPT1酶切可将第2类序列区分开来,而第1、4、5、6类序列由于序列之间同源性较高,除了突变的位点无法找到特异的酶切位点之外,即使存在酶切位点也无法准确地将不同序列区分开。由于Genbank关于蠕形螨的序列研究较少,已有序列之间同源性较高,可供RFLP序列分析的基因较少,本次试验将PCR-RFLP分子标记技术成功应用于蠕形螨研究,蠕形螨几丁质合成酶测序和酶切结果可用于蠕形螨的物种鉴定、亲缘关系及进化研究。