摘要
单链构象的多态现象(SSCP)是根据PCR技术广泛用于检测不同DNA序列的一门技术,由遗传学家开发的致突变检测,最近已采用于病毒基因组准种的分析,如丙型肝炎病毒(HCV)。由于该技术严格的标准化及其检测的局限性使之很难推广,HCV高变异区准种内的变异体被克隆到Puc 119,引起质粒定量,这种变种可用作SSCP最佳模板,所研究的变量有许多检测到的变异体,少数变异体检测的敏感性,电泳温度、单链DNA产生的方法、PCR循环次数的影响以及与校读能力有关的DNA多聚酶的应用。结果表明,它是能在准种内至少测出5种变异体的最佳方法,并能检出低至2%水平的准种内的变异体,电泳在室温18小时其重复性最好,使用Taq多聚酶单个引物作20次循环产生的单链DNA给准种构成一个精确的映象,Pfu多聚酶的应用减低了检测较小的带型的敏感性。SSCP法提供了评价HCV准种一个精确的工具。