玉屏风散对小鼠胸腺上皮细胞介导的皮肤淋巴细胞功能的影响

目的研究玉屏风散对BALB/c小鼠胸腺上皮细胞(TEC)及TEC介导的小鼠淋巴细胞功能的影响。方法分离BALB/c小鼠皮肤组织,给予不同浓度玉屏风散、胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)、及给予不同浓度玉屏风散的TEC培养皮肤组织3 d,实验分为对照组、玉屏风散低剂量组(YPF-L)、玉屏风散中剂量组(YPF-M)、玉屏风散高剂量组(YPF-H)、TSLP低剂量组(TSLP-L)、TSLP中剂量组(TSLP-M)、TSLP高剂量组(TSLP-H)、与TEC共培养组(TEC)、TEC共培养低剂量组(TEC-L)、与TEC共培养中剂量组(TEC-M)、与TEC共培养高剂量组(TEC-H),免疫组化法检测皮肤组织中CD3,CD4,CD8和TSLP的表达;分离小鼠脾淋巴细胞和胸腺细胞,MTT法检测玉屏风散对脾淋巴细胞、胸腺细胞和TEC增殖的影响(24,48,72 h);qPCR检测玉屏风散对TEC中TSLP、信号传导及转录激活因子3(STAT3)、白细胞介素6(IL-6)、IL-7、IL-10、IL-12、IL-17和肿瘤坏死因子α(TNF-α)mRNA水平变化;ELISA检测玉屏风散对TEC中IL-7水平的影响;流式细胞术检测玉屏风散对TEC与脾淋巴细胞和胸腺上皮细胞共培养2 d后两细胞中CD3,CD4,CD8和CD45阳性细胞的变化。结果免疫组化结果显示,与对照组相比,YPF-L,YPF-M和YPF-H组皮肤组织内CD3,CD4,CD8阳性细胞数量无明显变化,TSLP未见表达。TEC,TEC-L,TEC-M和TEC-H组皮肤组织内CD3,CD4,CD8阳性细胞数量增加,且给药组较明显,TSLP未见表达。TSLP-L,TSLP-M和TSLP-H组皮肤组织内CD3,CD4,CD8阳性细胞数量无明显变化,TSLP表达增强。说明玉屏风散可通过调节TEC提高皮肤免疫功能,且与TSLP无明显关系;与对照组相比,玉屏风散对TEC的增殖无明显影响,48 h时玉屏风散12.5,25,50,100,200 mg·L^-1对脾淋巴细胞和胸腺细胞具有一定的增殖作用(P<0.05);与对照组相比,不同浓度玉屏风散均能够显著下调TEC中TSLP,STAT3,IL-6,IL-10,IL-12,IL-17和TNF-αmRNA水平(P<0.01),显著上调IL-7 mRNA水平(P<0.01);ELISA结果显示,玉屏散低、中、高剂量组TEC中IL-7水平分别为(0.18±0.04,0.21±0.03,0.23±0.07)mg·L^-1,与对照组(0.15±0.02)mg·L^-1相比,低剂量组上调了TEC中IL-7的水平(P<0.05),中高剂量组显著上调了TEC中IL-7的水平(P<0.01);与脾淋巴细胞及胸腺细胞单独培养组、TEC和脾淋巴细胞及胸腺细胞共培养组相比,玉屏风散提高了两细胞中CD3,CD4,CD8阳性细胞数量(P<0.05),对CD45阳性细胞无明显影响。结论玉屏风散可通过上调胸腺上皮细胞IL-7的水平,从而提高BALB/c小鼠皮肤淋巴细胞的数量及功能。