槐定碱通过靶向MAPKAPK2抑制人结直肠癌的发展

目的研究槐定碱对人结直肠癌发生发展的影响及其分子机制。方法利用CCK8,流式细胞术和免疫荧光等实验方法,阐明槐定碱对结直肠癌细胞增殖,自噬,凋亡和周期的影响。通过PharmMapper和KEGG databXase等网络药理学方法,发现槐定碱的潜在靶标。并利用CETSA,DARTS分析和蛋白质免疫印迹实验研究槐定碱对其靶标的影响。结果槐定碱能显著抑制结直肠癌细胞增殖和形成集落的能力。槐定碱在浓度为0~160μmol·L^-1范围内,呈剂量依赖调节细胞自噬、凋亡和周期的相关蛋白。槐定碱80~160μmol·L^-1处理的细胞进行流式细胞术检测,结果显示,槐定碱引起细胞G2/M期阻滞并促进细胞凋亡;细胞内LC3的免疫荧光显示,LC3明显上调,表明槐定碱促进结直肠癌的自噬。过表达MAPKAPK2能显著恢复槐定碱引起的细胞阻滞及自噬、凋亡的促进作用;siRNA敲低MAPKAPK2显示与槐定碱相似的作用,且同时敲低MAP⁃KAPK2和槐定碱处理后作用更加显著。通过临床数据分析,MAPKAPK2的高表达伴随着病人的预后不良。结论槐定碱通过靶向MAPKAPK2促进细胞自噬、凋亡和周期阻滞,从而抑制结直肠癌的发生与发展。