通络清脑注射液通过减轻星形胶质细胞神经肿胀及抑制HMGB1/TLR4炎症通路对脑缺血再灌注大鼠脑水肿的影响

目的运用大鼠脑缺血再灌注模型,观察通络清脑注射液(TLQN)及其单体对缺血再灌注大鼠急性期水肿的及高迁移率族蛋白(HMGB1)/Toll样受体(TLR4)通路的影响。方法用线栓法建立大鼠脑缺血再灌注模型,随机分为再灌注组(CIR)、TLQN组、三七总皂苷(PNS)组、栀子苷+黄芩苷(BA+GE)组,手术当天给药,尾静脉注射给药2 d,每天1次。假手术组(Sham)正规饲养,设立再灌注24和48 h为观察期。①观察PNS对脑缺血再灌注小鼠的神经功能评分、脑干湿重影响;②采用生化法检测小鼠脑缺血侧皮层IL-6,IL-1β,IL-10,TNF-α浓度含量;③Western印迹法检测TLQN及其单体对缺血再灌注大鼠24和48 h皮层GFAP,AQP4,HMGB1,TLR4和p-NF-κB表达及蛋白水平的变化。④免疫荧光检测TLQN及其单体对缺血再灌注大鼠24和48 h皮层GFAP,AQP4,HMGB1,TLR4和p-NF-κB表达及蛋白水平的变化。结果①神经功能评分结果显示,再灌注大鼠出现明显的神经功能缺损症状,与24和48 h CIR组相比,TLQN(48 mg·kg^-1)组、PNS组和BA+GE组大鼠神经功能评分明显降低(P<0.05);与Sham组相比,再灌注24和48 h,CIR组大鼠脑含水量明显增加(P<0.01),TLQN(48 mg·kg^-1)组小鼠在再灌注24 h后脑含水量明显降低(P<0.01);再灌注48 h,BA+GE组和PNS(60和120 mg·kg^-1)组脑含水量明显降低(P<0.05)。②炎性因子检测结果显示,与Sham组相比,CIR组大鼠缺血侧大脑皮层IL-6,IL-1β,TNF-α明显上升(P<0.01),IL-10无明显变化(P>0.05);给予TLQN和PNS(48和12 mg·kg^-1)干预后,再灌注24和48 h后,大鼠缺血侧大脑皮层IL-6,IL-1β,TNF-α明显下降(P<0.01)。③Western印迹结果显示,与Sham组相比,CIR组大鼠缺血侧大脑皮层AQP4浓度明显升高(P<0.01),GFAP激活(P<0.01),并且HMGB1,TLR4和p-NF-κB也明显上升(P<0.01);给予TLQN和BA+GE组,PNS(48和12 mg·kg^-1)干预后,再灌注24和48 h后,大鼠缺血侧大脑皮层AQP4浓度显著降低(P<0.05);GFAP明显受到抑制(P<0.05),HMGB1,TLR4和p-NF-κB含量也明显下调(P<0.05)。④免疫荧光结果与Western印迹法相似,与Sham相比,CIR组大鼠缺血侧大脑皮层AQP4浓度明显升高(P<0.01),GFAP激活(P<0.01),并且HMGB1,TLR4,p-NF-κB也明显上升(P<0.01);给予TLQN和PNS(48和12 mg·kg^-1)干预后,再灌注24和48 h后,大鼠缺血侧大脑皮层AQP4浓度显著降低(P<0.05);GFAP明显受到抑制(P<0.05),HMGB1,TLR4,p-NF-κB含量也明显下调(P<0.05)。结论TLQN可以抑制缺血再灌注大鼠急性期梗死区域面积扩大及脑水肿的损害,其作用机制可能是通过减轻HMGB1/TLR4炎性通路,从而降低星形胶质细胞肿胀和AQP4的表达。