不同剂型的辛伐他汀通过iNOS/eNOS的平衡调节对脓毒症血管内皮细胞的保护效应

目的研究不同剂型的辛伐他汀通过调节诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)/内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)平衡对脓毒症小鼠模型中的腹主动脉血管及脓毒症血管内皮细胞损伤模型产生的影响。方法使用LPS诱导人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)形成脓毒症血管内皮细胞损伤模型,分别给予普通辛伐他汀制剂(SV)及辛伐他汀纳米粒制剂(NP)进行处理,应用流式细胞仪检测细胞凋亡情况,用酶联免疫吸附测定法检测细胞培养上清液中的IL-6、TNF-α释放情况。Western blot法检测eNOS和iNOS蛋白表达;CLP法诱导脓毒症小鼠造模,免疫组化法检测腹主动脉组织中iNOS和eNOS蛋白表达情况。计量资料以均数±标准差(Mean±SD)表示,多组间比较采用单因素方差分析,组间比较采用SNK-q检验或Tamhane T2检验,以P<0.05为差异有统计学意义。结果与对照组比较,LPS诱导形成的脓毒症内皮细胞凋亡率明显增加,与对照组比较,细胞凋亡率为(52.6±1.6)%vs(5.7%±1.1)%,P<0.01。而应用SV和NP均能减轻HUVEC凋亡,与LPS处理组比较,细胞凋亡率分别为(36.4±1.2)%、(37.0±1.0)%vs(52.6±1.6)%,均P<0.01。经LPS刺激24 h后,IL-6和TNF-α释放量显著增加;而应用SV和NP处理对于LPS刺激增加的IL-6水平并无抑制效应。辛伐他汀可以降低HUVEC中由LPS诱导增加的TNF-α释放量,而NP组较SV组抑制作用差异无统计学意义。应用Western blot测定HUVEC中eNOS和iNOS蛋白表达,eNOS表达在LPS组降低明显,iNOS表达则在LPS组明显升高(eNOS/GAPDH:0.36±0.02 vs 0.57±0.01,iNOS/GAPDH:0.80±0.19 vs 0.55±0.18,均P<0.01),NP组对于eNOS的恢复效应高于SV组(P<0.05);NP和SV均能明显降低iNOS水平,但是两组之间差异无统计学意义。动物腹主动脉免疫组化显示,在CLP组,eNOS蛋白半定量表达明显降低,而iNOS蛋白的半定量表达则明显增高(均P<0.01);辛伐他汀不同制剂均可提高eNOS蛋白水平,且NP组对于eNOS的恢复效应要明显高于SV组,组间差异有统计学意义(P<0.01);而CLP组中iNOS的表达上调,应用辛伐他汀可以使其水平明显下降(均P<0.01),但SV组和NP组间差异无统计学意义。脓毒症体内与体外模型中iNOS/eNOS比值显著升高,辛伐他汀的应用可使比值降低,但SV组与NP组间差异无统计学意义。结论辛伐他汀可以抑制内皮细胞中TNF-α的释放,阻遏内皮细胞的凋亡,可能涉及到iNOS/eNOS的平衡,新型的纳米粒制剂仅在部分指标上与静脉制剂存在差异,仍需进一步深入剂型改良。