三七原生质体的制备

Preparation of Panax notoginseng protoplast

原生质体因打破了细胞壁的限制,成为遗传转化和体细胞杂交的理想受体。为了以酶解法制备高产量、高活力的三七原生质体,基于组织培养技术,以三七的愈伤组织为试验材料,设置不同纤维素酶和果胶酶的浓度配比,同时探究三七愈伤组织不同培养天数、不同酶解时间、酶液不同渗透压以及离心纯化收集原生质体时不同离心力对原生质体制备的影响,确定三七愈伤组织原生质体分离的最佳条件,以获得较高产量和活力的原生质体材料。结果表明,三七愈伤组织继代培养15d,酶液组成为15mg/mL纤维素酶+7mg/mL果胶酶+CPW液+0.7mol/L甘露醇,酶解时间为7h,以800r/min离心收集原生质体时其产量和活力较高。