云红梨1号HY5基因原核表达载体的构建、表达和纯化

Construction,expression and purification of HY5pgene prokaryotic expression vector of “Yunhongli No.1”

HY5为调控光形态建成的转录因子,调控花青素的生物合成与累积。通过构建云红梨1号HY5基因的原核表达载体,旨在为研究HY5蛋白的生物功能奠定基础。将云红梨1号的HY5基因构建到原核表达载体pGEX-4T-1上,并对其进行诱导表达,通过谷胱甘肽-S-转移酶(GST)亲和层析色谱柱纯化融合蛋白。结果表明,重组质粒pGEX-4T-1-PyHY5的酶切检测及测序结果均正确,表明重组质粒载体构建成功。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)结果显示,用100 mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)在37℃、220 r/min条件下诱导3 h后收集诱导菌株,在BL21菌株中均有明显的目的条带,诱导表达后的融合蛋白大小约为43.90 ku;PyHY5蛋白能够与pGEX-4T-1载体上的GST标签蛋白进行融合表达。通过研究成功构建了pGEX-4T-1-PyHY5原核表达载体,诱导表达并纯化出PyHY5融合蛋白为进一步研究其生物学功能奠定了基础。