葛根芩连汤防治非酒精性脂肪性肝炎作用相关的差异蛋白筛选

目的采用nano-LC-LTQ/Orbitrap-MS蛋白质组学技术筛选鉴定炎症模型RAW264.7细胞模型组与葛根芩连汤含药血清组差异表达蛋白,推测葛根芩连汤防治非酒精性脂肪性肝炎(NASH)的作用机制。方法取对数生长期且状态良好的细胞进行实验,细胞分为模型组和中药组,以0.1μg/mL LPS诱导RAW264.7细胞24h建立炎症模型,中药组给予10%葛根芩连汤含药血清+10%空白血清,模型组给予20%空白血清共同干预24h后收集细胞蛋白。BCA法测定蛋白浓度,再对蛋白进行变性、还原、烷基化、酶解及脱盐处理,利用nano-LC-LTQ/Orbitrap-MS分析检测,利用Xcalibur软件和Proteomediscoverer1.4进行数据处理,运用SIEVEv 2.1(×64)进行无标定量分析寻找相关差异蛋白,筛选并鉴定差异表达蛋白,并对差异表达蛋白进行生物信息学分析和绘制网络互作图。结果葛根芩连汤含药血清组与模型组差异表达蛋白共1424个,经生物信息学分析筛选出4个与NASH相关的差异表达蛋白,其中2个上调蛋白(脂素3、低密度脂蛋白受体),2个下调蛋白(一氧化氮合酶3、丝裂原激活蛋白激酶14)。GO分析显示差异表达蛋白主要涉及氧化应激调控,代谢通路调节等生物过程。网络互作图显示MAKP14在NASH疾病中具有重要作用。结论通过有效的比较分析,得到了一些与NASH密切相关的差异表达蛋白,为研究葛根芩连汤防治非酒精性脂肪性肝炎的分子机制提供了新靶点。