鸡新城疫、传染性法氏囊和传染性支气管炎病毒三重RT-PCR检测方法建立

为建立快速同步检测鸡源新城疫病毒、传染性法氏囊病毒与传染性支气管炎病毒的多重RT-PCR检测方法,并应用于临床检测。参考GenBank中NDV NP、IBV N和IBDV VP基因序列,设计了3对特异性引物。通过优化引物浓度及退火温度建立多重RT-PCR方法,并进行特异性、敏感性和重复性试验。结果显示,成功建立了检测NDV、IBDV和IBV的三重RT-PCR方法,具有良好的特异性和稳定性,只扩增出NDV、IBDV和IBV的特异性片段,对鸡大肠杆菌、鸡沙门氏菌、鸡巴氏杆菌和鸡马立克等其他无关病原核酸无扩增;对NDV、IBDV和IBV核酸最低检测量分别为NDV6.18×10^1 copies/μl、IBDV 8.64×10^6 copies/μl和IBV2.57×10^2 copies/μl;用该方法进行多次重复性试验结果一致。结果表明,所建立方法对NDV、IBDV和IBV的三重RT-PCR方法特异性强、敏感性高、重复性好;为鸡源新城疫、染性法氏囊与传染性支气管炎临床混合感染病例的诊断和流行病学调查提供了可靠的方法。