miR-656-3p靶向ATP10A基因调控阿尔茨海默病模型细胞凋亡的分子机制

目的探究微小RNA-656-3p(miR-656-3p)对阿尔茨海默病(AD)模型细胞增殖、凋亡的影响及潜在作用机制。方法通过不同浓度淀粉样蛋白(Aβ25~35)(0、5、10、20μmol/L)作用于SH-SY5Y细胞,选取最优浓度构建AD模型细胞。荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测不同浓度Aβ25~35和作用时间对miR-656-3p表达量的影响,噻唑蓝(MTT)检测模型细胞的增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,观察过表达miR-656-3p或敲低腺苷三磷酸酶(ATP)10A对细胞增殖、凋亡的影响;在线软件TargetScan预测和双荧光素酶报告基因验证miR-656-3p与ATP10A的靶向关系;蛋白质印迹(Western印迹)分析过表达或敲低miR-656-3p对ATP10A蛋白表达量的影响,共转染过表达miR-656-3p和ATP10A或敲低miR-656-3p和ATP10A,观察ATP10A对miR-656-3p调控细胞增殖、凋亡的影响。结果不同浓度Aβ25~35对SH-SY5Y细胞增殖起抑制作用(P<0.05),且具有浓度依赖性,其中10μmol/L Aβ25~35诱导的细胞增殖活性变化较大。miR-656-3p在细胞模型中表达量显著降低(P<0.05),ATP10A表达量显著增加(P<0.05);过表达miR-656-3p和敲低ATP10A可显著促进模型细胞增殖活性(P<0.05),抑制凋亡(P<0.05);ATP10A是miR-656-3p的靶基因,二者表达量呈负相关;ATP10A可逆转miR-656-3p对模型细胞增殖、凋亡的调控作用。结论miR-656-3p通过负反馈调节ATP10A调控AD模型细胞增殖、凋亡。