miR-199a-5p对鹅颗粒细胞凋亡的影响及其机制

Effect of miR-199a-5p on goose granulosa cell apoptosis and its regulatory mechanism

为了揭示miR-199a-5p在鹅卵泡颗粒细胞凋亡中的作用及调控机制,本研究分离培养鹅等级卵泡颗粒细胞并转染miR-199a-5p相似物(mimic)和抑制物(inhibitor),采用qPCR法检测细胞凋亡相关基因的mRNA表达量;为进一步探究其作用机制,结合RNAhybrid和Targetscan 7.0预测miR-199a-5p靶基因,然后在中国仓鼠卵巢细胞系(CHO)中采用双荧光素酶报告系统检测miR-199a-5p对血管生成因子A(vascular endothelial growth factor A,VEGFA)3′UTR荧光素酶活性的影响,最后采用qPCR检测miR-199a-5p对鹅颗粒细胞VEGFA表达量的影响。结果显示,过表达miR-199a-5p能显著升高BCL2/BAX比值(P<0.05),显著下调Caspase3 mRNA表达量(P<0.05);抑制miR-199a-5p则显著下调BCL2/BAX值(P<0.05),对Caspase3 mRNA表达量无影响(P>0.05)。双荧光素酶报告载体系统发现,miR-199a-5p能极显著抑制VEGFA-WT报告载体荧光素酶活性(P<0.01),但对VEGFA mRNA表达量无显著性影响(P>0.05)。上述试验结果表明,miR-199a-5p可能通过抑制BAX和Caspase3表达量来抑制鹅颗粒细胞凋亡,但在鹅颗粒细胞中miR-199a-5p是否通过VEGFA调控细胞凋亡需要进一步研究。